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蛋白質組學(Proteomics)是後基因組時代的重要研究領域,旨在全麵研究生物體內所有蛋白質的表達、結構、功能、修飾及其相互作用。它不僅是基因組學的補充,更是理解生命活動分子機製的核心手段,它是一種基於質譜檢測的分析技術。
該方法的大致過程是將從樣本中提取到的蛋白水解/酶解為肽段,然後進行質譜檢測,根據肽段的鑒定和定量信息推測出其對應蛋白的鑒定和定量結果。因此,目前的蛋白質組學樣品製備流程,通常均會包括蛋白提取、蛋白酶解和肽段除鹽三個步驟。
一、蛋白提取:
蛋白質提取旨在從含多種幹擾物的生物樣本中釋放並純化蛋白質。通過裂解液(含SDS、尿素等去垢劑)破壞樣本結構,結合超聲/研磨促進蛋白溶解。針對雜質或SDS幹擾,可采用沉澱/複溶等方法純化。血漿需去除高豐度蛋白以提高檢測靈敏度。提取方法需適配後續分析需求。
二、蛋白酶解:
蛋白質是一類含有空間結構的高分子化合物,在酶解前需要提前加入還原劑提高酶解效率。蛋白質組學中常用胰蛋白酶進行酶解處理,將蛋白酶解為適宜質譜檢測的肽段長度。
三、肽段除鹽:
蛋白樣本前處理通常是在含鹽緩衝體係中進行,目前常使用層析法,主要原理是SDB或C18材質的層析柱可以結合待檢測肽段,從而達到分離和純化肽段的目的。脫鹽後的肽段通過真空久久精品国产亚洲AV无码麻豆抽幹後,即可於4℃或-20℃短期保存,等待後續的質譜檢測。
四、如何建立一個高效的樣品製備流程?
在蛋白提取和酶解階段,越來越多的公司采用一體式自動化前處理儀器。如北京青蓮百奧生物有限公司生產的前處理機器人,可同時處理 1-96 個樣本。酶解後的樣品放入久久精品国产亚洲AV无码麻豆幹燥後進質譜檢測。久久精品国产亚洲AV无码麻豆以其高通量、快速、避免交叉汙染等優勢,迅速成為蛋白質組學測試中的必備儀器。
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